电穿孔转染效果不佳，其影响因素可能有哪些？

若电转效果不佳，可考虑一下条件进行优化：
1. 电场参数
    不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以采取较为简便的间接法。文献显示存活率在50%左右的电场参数为理想参数，故可间接测定存活率来确定最佳场强值。
2. 脉冲过程
    ①脉冲波形主要分为两种，方波脉冲和指数递减波脉冲。一般哺乳动物细胞电转选择方波脉冲，细菌、酵母菌、昆虫细胞选择指数递减波脉冲。
    ②脉冲时间的选定主要取决与脉冲波形。在方波脉冲中，脉冲时间可直接设定。在指数递减波脉冲中，脉冲时间是指电压衰减至初始电压1/3时所用的时间，等于电容（C）与电阻（R）的乘积，单位是ms。在参数优化中，增加电压应当降低脉冲时间，而减小电压则应当增大脉冲时间。
    ③一般而言，对于大多数细胞类型都选择单次脉冲。而在有些情况下可能会用到多次脉冲，因为低电压、短脉冲时间、多次脉冲可有效避免细胞损伤。多次脉冲建议中间间隔1min。
3. 细胞因素
    用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。细胞悬液浓度一般为1*10⁶/ml，当细胞生长密度大于3*10⁶/ml，转染效率会下降。
4. 质粒因素
    从质粒浓度看，细胞密度为1*10⁶/ml，DNA用量在2-5 μg/ml转染效率最高。
5. 温度
    一般情况下，电转的过程是在室温下进行，但在电击前后需对细胞进行冰浴处理。
6. 电转后培养液的选择
    细胞在电击后十分脆弱，其培养液的选择应注重提高细胞的存活率，一般选择 低渗的RPMI 1640+10％FCS。除此之外，可参考加入50 mmol／L海藻糖+1.25％DMSO。