对于肌肉组织中使用的病毒载体通常会使用AAV，因为AAV不仅能够高效特异性地靶向肌肉组织，而且能在肌肉组织中持久表达。
不同血清型AAV的肌肉感染嗜性
靶向肌肉的AAV血清型主要为AAV1, AAV6, AAV8和AAV9。其中，对骨骼肌和心肌的组织特异性以AAV8, 9较高。
图1. 不同血清型在腓肠肌中载体表达情况[1]
启动子选择
常见启动子：CMV[2]、CAG[3]、MCK[4]
AAV在肌肉中注射方式
应用病毒载体感染肌肉组织进行研究，一般分为系统注射和肌肉内注射。
1、肌肉注射
一般选取鼠前后肢部位注射，注射时针头要垂直快速刺入肌肉，如无回血现象即可注射。肌肉内注射是一种定点注射，可以在注射点附近高效表达，但缺点是病毒扩散十分有限，因此往往需要多点注射，一般每个点在5-10uL。
2、系统注射
系统注射表达较均匀，但是大部分病毒会被其他脏器组织吸收，导致靶向肌肉的病毒较少。
3、尾静脉注射
从动物尾部的静脉注射病毒，以输送到全身各处肌肉。这种方式病毒表达较均匀，但是大部分会被其他脏器组织吸收，导致靶向肌肉的病毒较少。
实例展示
利用AAV载体介导营养不良小鼠肌肉和肌肉干细胞的体内基因编辑
载体： AAV9（AAV-SaCas9 + AAV-Ai9 gRNAs 或者AAV9-Dmd23 gRNAs）；
注射方式：胫前肌（TA）原位注射&溶媒注射，每只小鼠注射病毒量7.5x1011vg；
启动子：CAGGS；
实验方法和结果：利用AAV9-CRISPR-Cas9核酸内切酶系统携带成对的gRNAs靶向识别并切除了DMD基因外显子23突变位点序列，成功构建了DMD外显子23缺失的mRNA转录本，恢复了小鼠体内具有生物学活性的抗肌萎缩蛋白DYSTROPHIN的表达。4周后免疫印迹，免疫荧光检测报告。
图1. 经过AAV9-CRISPR修饰的肌营养不良卫星细胞中DYSTROPHIN（抗肌肉萎缩蛋白）的回复性表达[5]
参考文献
[1]Carmela Zincarelli, Molecular Therapy, 2008
[2]Weng S et al. Cancer Gene Therapy, 2020
[3]Adriouch S et al. Frontiers in microbiology, 2011
[4]Gatto F et al. Scientific reports, 2017
[5]Tabebordbar M . Science, 2016
