荧光素神经元示踪需要注意的问题有哪些？

（1）路径选择：荧光素也可用于顺行示踪，但标记较弱，因此不推荐。
（2）标记方法：不同荧光素具有不同激发波长和发射波长，故可使用双标或多重标记的方法进行标记。但不同荧光素逆行运输速度差别较大，实验时可分两次手术注入荧光素。
（3）扩散问题：有些荧光素在到达胞体后有扩散出神经元胞体而染出其周围神经胶质细胞的倾向，因此适当存活时间的选择很重要。
（4）有效注射部位：由于荧光素分子量较小，逆行示踪更易扩散，故比HRP法更难确定有效注射部位。同时也存在存在过路纤维摄入问题，分析结果时需要额外注意。
（5）褪色问题：荧光素在激发光照射下较快褪色，因此允许观察的时间短。即使在低温、避光条件下，切片保存时间仍有限，不能长期保存。
（6）优化方法：在50 %甘油和50 %的PBS混合液配制的封片剂中加入2.5%三乙烯二胺（triethylene diamine）可有效地延长观察和保存时间。也可将荧光素包裹在乳胶微球内作追踪剂，减弱扩散、过路纤维和褪色较快的问题。