时间：2022-09-02 23:04
目前用于神经网络示踪的嗜神经病毒伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)和单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type 1,HSV)都属于α疱疹病毒科，是有囊膜的球形双链DNA病毒，直径约200~250nm，基因组约150kb，编码约70个基因。
特异性顺行跨突触应用最多的病毒是单纯疱疹病毒1型H129株，H129具有顺向跨突触传播特性，和神经冲动传递的方向一致，适合于神经输出环路的示踪研究，常作为顺行跨多突触神经环路示踪剂。
HSV病毒载体优点
（1）基因组序列结构、遗传背景清楚，便于分子遗传改造；
（2）近一半基因为非必需基因，外源基因容载量高达40kb，可携带复杂调控元件和多样外源基因；
（3）宿主范围广，能有效感染斑马鱼、啮齿类和非人灵长类等多种生物；
（4）在宿主体内扩增繁殖效率高，能快速高亮标记。
HSV病毒载体局限性
（1）细胞毒性，病毒感染后一定时间内会引起宿主免疫反应。在病毒的注射位点和感染脑区，神经元形态发生变化，出现病变、死亡，并引起大脑炎症反应。通常在感染晚期，实验动物就会死亡。
（2）宿主免疫能力差异导致病毒感染效率的个体差异。
免疫抑制剂的应用
硼替佐米是一种免疫抑制剂，是一种治疗多发性骨髓瘤的蛋白酶体抑制剂。据报道，硼替佐米可以通过抑制蛋白酶体降解病毒衣壳发挥免疫抑制作用，增强小鼠体内AAV的感染。病毒复制和基因表达受蛋白酶体活性影响的病毒，如乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒，蛋白酶体抑制剂可以用来增强病毒对神经元的感染。
2022年8月10日，广东省智能科学与技术研究院张旭院士实验室与李昌林研究员实验室在国际权威学术期刊《美国科学院院报》（Proceeding of the National Academy of Sciences）在线发表题为“Distinct neural networks derived from galanin-containing nociceptors and neurotensin-expressing pruriceptors”的研究论文。该研究采用了单纯疱疹病毒（HSV，Herpes simplex virus）神经示踪技术，联合使用免疫抑制剂硼替佐米，获得了HSV对神经元的高感染率。
实验步骤：
1、病毒注射位点：L5 DRG；
2、硼替佐米注射流程：
注射时间：病毒注射后立即给药；
注射方法：皮内注射；
注射剂量：1 mg/kg；
注射浓度：0.1 mg/ml；
3、周围神经损伤基因标记物的检测；
4、荧光显微镜成像。
实验结果：
术后6-7天，L5 DRG中约50%的神经元被EYFP标记，包括小直径和大直径的神经元，被标记的细胞数是病毒注射后接受生理盐水治疗的对照组的5倍。
另外通过检测周围神经损伤的基因标记物激活转录因子3(Atf3)的表达，排除了小鼠DRG中有明显神经元损伤。
结论：
在小鼠L5 DRG中微量注射HSV病毒后立即给予免疫抑制剂注射，可有效增强HSV对小鼠DRG神经元的感染。
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