小布tips | 外周PRV示踪-快,准,亮!你想要的都在这!

时间:2023-02-07 21:05

脑是机体最为复杂的系统,决定着情感、记忆、学习等生理活动。神经环路是脑行使功能的基础,明确神经环路的构成和工作原理,对于认识脑、利用脑和保护脑具有十分重要的意义。目前,嗜神经工具病毒被广泛用于中枢神经和外周神经的解剖学研究,在神经环路结构和功能解析研究中发挥重要作用。

PRV Bartha最初被用于通过注射外周组织研究传出神经通路,以及通过抗体免疫组化研究外周神经通路。在仓鼠玻璃体腔注射可表达绿色荧光蛋白的 PRV Bartha 衍生物 PRV-152 后,病毒仅通过自主神经回路逆向跨突触传播,感染视交叉上核[1]。Banfield[2]等构建表达红色荧光蛋白的 PRV Bartha 重组病毒 PRV-614,建立双病毒跨神经元标记技术,研究单个神经元与大脑中的多个神经回路之间的连接。Jia 等[3]优化了报告基因的表达水平,构建了两个新的逆行跨多突触示踪病毒 PRV531 和 PRV724。


 

随着PRV病毒在中枢神经环路和外周器官中枢调控网络研究领域的广泛应用,香港宝典免费资料网在PRV生产和使用等方面积累了丰富经验。目前PRV在中枢神经系统环路示踪研究中的使用趋于成熟,但是在外周脏器的中枢调控网络解析中,一直存在示踪效果不佳的情况,例如示踪结果不稳定、荧光信号弱,标记效率低等。

详见往期推文:小布tips | 外周——中枢神经环路标记整体服务

 

下面,小布就以我们公司PRV在中枢标记及外周不同部位的注射测试结果为实例,分享一些PRV使用tips。


 

 

 

 

PRV在小鼠中枢及外周使用对比

 

 

 



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PRV在小鼠中枢及外周的示踪测试效果图

 

 

 


1、中枢网络示踪

产品:BC-PRV-724;

剂量:100 nl;

表达时间:3天。

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2、某内脏器官的神经调控网络示踪

产品:BC-PRV-531-Plus;

剂量:3 ul;

表达时间:4-5天。

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3、某腺体的神经调控网络示踪

产品:BC-PRV-531-Pro;

剂量:3 ul;

表达时间:4-5天。

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Notes:

1. 由于PRV病毒对动物机体有一定的毒性作用,建议选择成年且健康状况良好的动物开展实验,以便更高效地完成相关示踪研究。

2. 注射PRV病毒之后,大约3-5天左右小鼠会出现相应的症状,应定期监测小鼠状态,当出现蜷缩不动、抽搐、颤抖等症状时可进行灌流取材,濒死状态取材时PRV感染效果最佳。

3. 注射PRV病毒之后,小鼠出现症状的时间窗不易掌控,建议从注射后第3天增加监测小鼠的频率;

4. PRV为逆向跨多突触病毒,动物实验时,可根据环路连接级数设定不同的取材时间。根据病毒生活周期推测其在中枢内的传播速度可能为24-36h,跨一级突触;36-48h跨两级突触;60-72h跨三级突触或更多,所以应根据实验需求合理安排取样时间。

5 活体实验中,若因表达时间较短等原因造成荧光信号较弱的情况,可通过免疫组化实验放大荧光信号。



 

 

 

 

PRV相关产品及服务

 

 

 

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参考文献

1. Pickard G E,Smeraski C A,Tomlinson CC,Banfield B W,Kaufman J,Wilcox C L,Enquist

L W,Sollars P J.J.Neurosci.,2002,22: 2701-2710

2. Banfield B W,Kaufman J D,Randall J A,Pickard G E.J.Virol.,2003,77: 10106-10112

3. Jia F,Lv P,Miao H,Shi X,Mei H,Li L,Xu X,Tao S,Xu F.Front.Neuroanat.,2019,13: 63
 

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时间:2023-02-07 21:05来源:未知 作者:admin8 点击: