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Q.rAAV储存条件,冻融一次会有多大的损失?
A.答案
-80℃分装储存,冻融一次损失10 % ,应避免反复冻融。保存6-12个月以上的样品,进行试验前,重新测一次滴度。病毒产品解冻后最好保持在冰格中,并尽快使用。如果解冻后的病毒一时用不完,滴度足够高时,4 ℃可保存1-2周。但应尽快使用,一般4 ℃放置一周,滴度会有4-5倍的下降。
Q.rAAV可以稀释吗?方法如何?
A.答案
可适当稀释,在实验过程中稀释病毒的等渗溶液没有其他特殊要求,常规的动物实验用PBS、生理盐水等即可。稀释后的样品尽量一次性用完。
Q.rAAV包装能力?
A.答案
AAV包装能力可以达到4.9 kb。两端ITR200-300 bp,外源基因插在两个ITR之间,随着插入外源基因的变大, AAV的包装能力将降低。
Q.AAV是否是复制缺陷性的?
A.答案
野生型AAV不能独立存在,需在辅助病毒如腺病毒、单纯瘪彦病毒存在的条件下,才能在感染的宿主细胞中复制合成装配蛋白,产生新的病毒颗粒。重组AAV载体(rAAV)的制备llPAAV的rep.及cap基因由外源基因表达框替代,而只保留了两端的ITR序列,在生产rAAV时,需要提供Rep和Cap蛋白的反式功能以及其他辅助病毒的辅助功能,带有外源基因的重组AAY基因组才会被营救、复制并包装成rAAV病毒。
Q.什么时候选择Lentivirus?
A.答案
慢病毒对分裂细胞和非分裂细胞均有感染能力,整合至细胞基因组并长期稳定表达,体内和体外实验皆可用。
Q.慢病毒稀释时应注意哪些操作?
A.答案
病毒液超过1 mL时,-80 ℃取出后可37 ℃水浴解冻;100-1000微升之间可室温解冻;小于100微升可在4 ℃冰上解冻,实验前5 min冰上取出,恢复至室温。使用PBS缓冲液或培养目的细胞无血清培养基稀释病毒,混匀分装后使用。稀释后的样品尽量一次用完。
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